NY∕T 3446-2019 奶牛短脊椎畸形综合征检测 PCR法(农业)
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ID： |
5883A13B08714E1C00CA621DA0B98300 |
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文件大小(MB)： |
0.19 |
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页数： |
6 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-24 |
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ICS 65.020.30,B 43 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3446一2019,奶牛短脊椎畸形综合征检测PCR法,2019-08 - 01 发布,Detection of brachyspina syndrome in dairy,cattle-PCR method,2019-11-01 实施,、‘/,飞," 中华人民共和国农业农村部发布,NY/ T 3446一2019,I,NV!T 3446- 2019,奶牛短脊椎畸形综合征检测PCR 法,范围,本标可t!';t定了奶牛短脊ffl 附形综合征的PCR 检测方法,本标刊1 适用于奶牛短脊椎畸形综合征基因型的分子检测与诊断,2 规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用,凡是不注日期的引用文件,GB!T 27642 牛,3 术语和定义,3. 1,缩短,2 11 88 1 98) ,4 原理,AAT,图A.L,6 试剂和材料,除非另有说明,6. 1 长片段1àqDNA 聚合酶,6. 2 1 0X PCR 缓冲液(含M g'+ ),6. 3 dNTPs (dATP ， dCfP ， dGTP 、d1TP4 种溶液的等比例混合液),6. 4 DNA 分子量标记,6. 5 核酸染料,6. 6 琼脂糖,6.7 75% 乙醇,6. 8 50XTAE 缓冲液,仅注日期的版本适用于本文件,明显,1: 21184870-,民: 5'-ATAAATA,见附录A 中的,取Tri s 碱242 g. 冰乙酸57 .1 mL.O. 5 mol/L EDT A( pH 8. 0)100 mL. 加水定容至1 000 m L . 室源,保存.,~/T 3446--2019,7 仪器设备,7.1 PCR 扩增仪,7.2 凝胶成像分析系统,7.3 电泳仪,7.4 水平电泳糟,7.5 可调移液器,7.6 离心机,7. 7 干式加热器(或水浴锅),7.8 电子天平,8 样晶,8. 1 样晶准备,收集牛血液(新鲜或抗凝血)、组织(耳组织、肌肉、尾组织、皮肤等)、带毛囊的牛毛、精液等试验材料,血液、精液、组织样品-20 0C 及以下低温保存备用;带毛囊的毛发浸入75% 乙醇中一200C 及以下低温保存,备用,8.2 DNA 提取,按GB/T 27642 规定的方法执行,9 试验步骤,9.1 PCR 扩增,9. 1. 1 PCR 反应体系,10XPCR 缓冲液〈含Mi+)2.5μL，dNTPs(2.5 mmol/L) 4. 0μL，上、下游引物(10μmol/ L) 各0.5μL,DNA 模板50 ng..100 ng ，长片段Taq DNA 聚合酶1. 5 U ，加水至25μLo,9. 1. 2 PCR 反应程序,940C预变性5 min;940C变'性30 s ， 580C退火1 min， 720C延伸2.5 min ， 35 个循环j72 0C 聚合延伸10 min,40C 保存,9.2 电泳检测,9.2.1 2.0% 琼脂糖凝胶制备,称取2g 琼脂糖，加100 mL lXTAE 煮沸，等温度降至500C.600C 时，加入核酸染料或其他替代物,9.2.2 上样电泳,取5μLPCR 扩增产物，上样于2.0%琼脂糖凝胶中进行电泳(3 V/cm..5 V/cm ，电泳1. 0 h.. 1. 5 h) ,在凝胶成像系统中观察电泳条带,10 试验数据处理,10. 1 正常个体,仅扩增出一条长3 738 bp 的PCR 产物，基因型命名为AA 型,10.2 BS 隐性携带者,同时扩增出长3 738 bp 和409 bp 的PCR 产物，基因型命名为AB 型,10.3 BS 患病牛,2,仅扩增出一条长409 bp 的PCR 产物，基因型命名为BB 型,PCR 检测结果示意图参见图A.2 ,NY /T 3446-2019,附录A,(资料性附录),PCR 引物位置和BS 检测结果示意图,A.1 引物位置示意图,见图A .1 0,J- 游引,物位点,突变型,409 hp,图A. l FANCl 基因中引物位置示意图,A.2 BS 检测结果示意图,见阁A. 2 ,说明,MI,4kh_,3 kh…,2kh…,lkh-,409 hp…,2 3 4 5 6,一,一,下游引,物位点,M2,3738 hp,…- 622 hp,- 527 11p,-四404 bp,- 309 bp,MI 一一- 1 kb DN 气LadJer 分子最标记? 2-135 阳性出带者在L 冈细(A Il!\，j),M2 -p?R 322 / M甲I 口NA Ma r kc r 分子:hl标记5 阳性对照,1.3" 一一正常个体基因型( AA 型) ; 6 空白对照.,图A.2 FANCl 基因PCR 检测结果示意图,3,EON-ω寸寸的'阳\妇Z,PCR i去,NY/T 3446~20 1 9,'r 国农业出版社出版,(北京市朝阳区麦子m街18 号楼),( ~ill政编码100 1 25 网址www. ccap.COnl.cn ),北京印刷一厂印刷,新华l ìm北京发行所发行各地新华g店经销,9告4峰安,争夺,印张0. 5 字数10 千字,2019 年10 月北京第I lX印刷,'峰,开本880 m m X 1230m01 1/16,2019 年10 月第1 版,书号16109 . 4872,定价. 1 2 . 00 元,*,版权专有侵权必究,NY / T 3446- 2019 举报电话(0 10) 59 19426 1……
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